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常州电泳加工是大电荷分子在均匀电场下穿过介质的过程

2021-04-02 09:02:03

常州电泳加工是大电荷分子在均匀电场下穿过介质的过程。常见的实现方法是凝胶电泳,该方法用于根据核酸在多孔基质中的迁移,按长度或蛋白质按大小,构象和电荷分离核酸。

常州电泳加工是一种基于净电荷,大小和在基质上的构象分离和纯化大分子的方法。由于磷酸主链的存在,核酸总体上带有负电荷。因此,它们以仅取决于其尺寸的迁移速率向阳极移动。蛋白质总体上带有正电荷或负电荷;这使蛋白质分子能够向称为等电点的pH方向移动,在该点上该分子没有净电荷。通过使蛋白质变性并赋予它们均匀的电荷,可以根据大小将它们分离。大分子在由琼脂糖或聚丙烯酰胺组成的基质或凝胶中进行电泳。

量取适量的琼脂糖粉,并添加到烧杯或烧瓶中的1X TAE缓冲液中。

注意:琼脂糖的量将取决于所需凝胶的百分比。电泳加工琼脂糖溶液的体积必须根据所用凝胶托盘的大小来准备。

通过在电磁加热板上加热溶解琼脂糖。另外,也可以在微波炉中加热,每分钟旋转一次,直到琼脂糖完全溶解。

电泳加工

当琼脂糖冷却至50-60°C时,向溶液中加入溴化乙锭。电泳加工另一个选择是在电泳后将凝胶浸入溴化乙锭溶液中。重要提示:溴乙锭是一种致癌剂。处理溴化乙锭时,请始终戴好手套和口罩。

在琼脂糖冷却的同时,准备用于凝胶浇铸的凝胶托盘,以使琼脂糖溶液在凝固之前不会流出。这可以通过使用托盘水坝,使用传统实验室胶带密封来确保。将梳子放在凹槽中,然后将托盘放在水平的位置。

缓慢倒入琼脂糖溶液,以使其均匀分布在托盘上,而不会在凝胶中滞留气泡。让凝胶在室温下固化。

移开梳子,用托盘将凝胶转移到主槽中,并填充1X电泳缓冲液,直到凝胶刚刚被缓冲液覆盖。

通过标准方案从细胞或组织中分离DNA。

用溴化乙锭染色时,在琼脂糖凝胶上检测所需的DNA浓度为2 ng。

将核酸样品与10X上样缓冲液混合。通常,3 µL的上样缓冲液就足够了,但小于10 µL的样品可以使用较小的体积。


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